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          • ACE 蛋白與肽類色譜柱 用于肽類和蛋白質的ACE 300?色譜柱
          詳情

          用于肽類和蛋白質的ACE 300?色譜柱

          • 300?超高純硅膠基質
          • C18、C8、C4、CN和苯基
          • 3μm、5μm和10μm粒徑
          • 高重現性
          • 非常穩定

          優異的峰形和可重現性已將ACE HPLC色譜柱確立為最優質產品。
          該品質也可被蛋白化學家所利用,以期在肽類、蛋白質和其他高分子量生物分子的分離中實現最佳性能和可重復性。

          ACE300?色譜柱具有多種多樣的規格和粒徑,可用于微細的分離、LC/MS分析和高速制備型分析(達工藝規模)。


          色譜分析優選惰性固定相用于離子化化合物的反相HPLC,因為它們可以最大限度地降低硅醇基對分離的不利影響。

          當分離含有極性官能團的化合物(特別是胺類)時,這可以改善峰形和可重現性。

          具有極低硅醇活性的新一代超惰性固定相使其在分離這些類型的化合物時可以獲得更佳的峰形和可重現性。

          致力于小分子研究的科學家迅速采用了這種新技術,大孔(300?)超惰性相可以使欲通過反相HPLC分離肽類和蛋白質的科學家們獲益。


          超惰性固定相對生物分子反相HPLC的益處
          提高靈敏度
          將TFA(三氟乙酸)用作肽類和蛋白質反相分離的流動相添加劑。
          該添加劑通常被用于改善肽類和蛋白質復雜混合物的峰形和分離度。

          如下圖所示,在流動相中使用0.1%TFA可以使填充有活性固定相的色譜柱產生與由超惰性固定相制備的新一代色譜柱相當的峰寬。

          然而,隨著TFA濃度降低至0.01%以及最終的0.005%,超惰性相上的峰寬保持不變,但活性固定相上的峰寬會發生變形。
          使用極低水平TFA分析肽類和蛋白質的能力有利于采用質譜法進行高靈敏度檢測。

          TFA可與多肽形成復合物合并增強選擇性。然而,該相同的復合作用會降低質譜儀的靈敏度。


          用于肽類和蛋白質分析的ACE 300?色譜柱

          蛋白質
          條件
          色譜柱:ACE 5 C18-300, 250 x 4.6mm
          流速:1.0ml/min
          溫度:環境
          流動相:A. 0.1% TFA(溶于水中) B. 0.1% TFA(溶于乙腈中),30分鐘內 5%-70% B
          檢測:UV, 280nm

          化合物
          1. 核糖核酸酶A
          2. 細胞色素C
          3. 全鐵轉鐵蛋白
          4. 脫輔基肌紅蛋白


          肽類

          條件
          色譜柱:ACE 5 C18-300, 250 x 4.6mm
          流速:1.0ml/min
          溫度:環境
          流動相:A. 0.1% TFA(溶于水中)B. 0.1% TFA(溶于乙腈中),25分鐘內10%-40% B
          檢測:UV, 220nm

          化合物
          1. 甘氨酸-酪氨酸
          2. 催產素
          3. 血管緊張素II
          4. 神經降壓素


          靈敏度和峰形,隨TFA的濃度而變化

          色譜柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300?
          流動相:A:TFA(溶于水中) B: 溶于乙腈中的TFA(按照上述說明為%TFA),37.5分鐘內10%-55%B。
          流速:1.5mL/min
          檢測:UV 200nm

          化合物
          1. 甘氨酸-酪氨酸
          2. 催產素
          3. 血管緊張素II
          4. 神經降壓素

          ACE 5 C18-300超惰性硅膠

          Vydac 218TP低純度“活性”硅膠

          隨著TFA濃度的降低,低純度硅膠色譜柱(右圖)顯示性能急劇下降。
          由超惰性硅膠制成的色譜柱(如ACE)會在TFA濃度降低時保持性能。

          備注:比較性分離物不代表所有應用。


          優化選擇性
          TFA和其他流動相添加劑與肽類和蛋白質的復合能力可用于調節選擇性并改善分離度。如下圖所示,將TFA濃度從0.1%降低至0.01%可使血管緊張素II和III實現分離。

          在超惰性ACE色譜柱的情況下,隨著分離度的顯著改善,峰形和靈敏度保持恒定。在Vydac色譜柱(填充有更具活性的固定相)的情況下,峰形被嚴重破壞。


          選擇性,隨TFA的濃度而變化

          色譜柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300?
          流動相:A:TFA(溶于水中)B: 80%TFA(溶于乙腈中),20%TFA(溶于水中),(按照上述說明為%TFA),15分鐘內25%-40%B
          流速:1.0 mL/min

          檢測:UV 215nm
          化合物:

          1.血管緊張素II
          2.血管緊張素III
          3.血管緊張素I

          ACE 5 C18-300
          超惰性硅膠

          Vydac 218TP
          低純度“活性”硅膠


          通過降低TFA濃度來改善分離度。由低品質硅膠制成的色譜柱顯示其性能降低。

          備注:比較性分離物不代表所有應用。


          增加PH范圍
          大多數生物分子是帶電荷的。

          肽類和蛋白質帶有多種電荷。從小分子的經驗來看,已流動相pH可以成為改變保留值并因此而優化帶電化合物分離度的有力工具。

          肽類也是如此。

          再次以使用血管緊張素II和III作為實例,下圖顯示在pH=2的條件下,ACE超惰性色譜柱或填充有更具活性固定相的色譜柱上這兩種肽未實現分離。

          通過將pH增加至7,這兩種色譜柱則均能提供良好的分離度。

          然而,盡管ACE超惰性色譜柱保持了良好的峰形,但填充低純度硅膠的色譜柱顯示其峰形較差和性能損失。

          在極性化合物的許多反相應用中觀察到了這種現象。

          在中等pH值時,硅醇相互作用更為普遍,因此峰拖尾在活性固定相上變得更加明顯。


          流動相pH對分離度的影響

          色譜柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300?
          流動相:

          pH 2 A:0.1% TFA(溶于水中) B: 0.1% TFA(溶于乙腈中)
          pH 7 A: 10mM NH4OAc(溶于水中) B: 乙腈 15分鐘內25%-40% B
          流速:1.0 mL/min

          檢測:UV 215nm
          化合物:

          1.血管緊張素II
          2.血管緊張素III
          3.血管緊張素I

          ACE 5 C18-300
          超惰性硅膠

          Vydac 218TP
          低純度“活性”硅膠

          調節流動相的pH是提高選擇性的有力工具。只有基于超純硅膠的色譜柱才能在更高的pH值下保持性能。

          備注:比較性分離物不代表所有應用。


          ACE®是Advanced Chromatography Technologies Limited的注冊商標。
          ACE ExcelTM和HSCTM是Advanced Chromatography Technologies Limited的商標。
          Advanced Chromatography Technologies Limited承認Advanced Scientific Instruments、Agilent Technologies Inc.、Alltech AssociatesInc.、GL Sciences Inc.、Idex Health&Science LLC、Phenomenex Inc.、Shimadzu Corporation、Thermo Fisher Scientific和Waters Corporation的注冊和未注冊商標,且與上述這些公司沒有任何隸屬關系。

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